PuriMagTMG-Strep
Streptavidinfunctionalmagneticmicroparticles
Orderinginformation
Name
Vol.
Scheme
G-Strep
PMG015-2
PMG015-5
2ml
5ml
1.概述
PuriMagTMG-Strep链霉亲和素磁珠通过链霉亲和素与生物素之间的高亲和力相互作用，可以普遍结合任何生物素化分子，如抗体、蛋白质、肽、DNA等。颗粒表面积大，捕获效率高。PuriMagG-Strep链霉亲和素-生物素生物分子复合物很容易使用磁铁与未结合的生物素-生物分子分离，因此提供了一种快速、简洁的方法来用磁性纳米颗粒标记生物分子。纯化的纳米颗粒-生物分子复合物可用于多种下游分离过程：蛋白质纯化、细胞分离、免疫沉淀和分子检测。
结合容量：
~50μgStreptavidin/mgbeads;
4000pmolfreebiotin/mgbeads;
300pmolbiotin-oligonucleotide/mgbeads;
20pmolbiotin-dsDNAfragments/mgbeads;
2.产品信息
ProductSpecifications
Description
PolymercoatedFe3O4nanoparticles
ParticleSize
200nm
NumberofBeads
~1.7×1010beads/mg
Matrix
Proprietarypolymer
Functionalgroup
Streptavidingroup
Groupdensity
~50μgstreptavidin/mgBeads
Magnetization
60~70EMU/g
Formulation
10mg/mLin25mMtris-HCl,0.15MNaCl,0.05%tween20,0.09%NaN3,
Storage
1yearat2~8℃.Donotfreeze.
3.使用方法
3.1质量控制
结合载量：每批SA磁性颗粒都经过游离生物素的保证最小结合载量测试。
蛋白质的非特异性结合：2,0.15MNaCl,℃.Afterwashingwith2×200ulincubationbuffertheproteinconcentrationinthesupernatantismeasured(A280).Nounspecificbindingisdetected.
无DNase活性：1ugDNAsubstrateisincubatedfor4hat37℃in100mlbufferM(10mMtris-HCl,10mMMgCl2,50mMNaCl,1mMdithioerythriol,)
无RNase活性：5ugMS2RNAareincubatedfor4hat37℃in100ml10mMtris-HCl,
无蛋白酶活性：10,20mMCaCl2,℃.AfterTCAprecipitation,thepro
3.2使用流程
Exa1.生物素标记的核酸与SA磁珠的结合
该程序可用于结合生物素化寡核苷酸和双链DNA。
1.使用前将珠子涡旋20秒。
2.将所需体积的PuriMag微珠移液到无核酸酶的微量离心管中。分离磁性颗粒。注意：50μL@10mg/mL（500μg）足以结合125pmol（~80μg）生物素化寡核苷酸或生物素化PCR产物（~40μg@500bp）。
3.除去上清液。将珠子重悬于100ul结合缓冲液（20mMTris·Cl，1.0MNaCl，1mMEDTA，0.02%Triton®X-100;pH值7.8）。
4.将适量的生物素化寡核苷酸与重悬的珠子在室温下孵育15分钟。轻轻混合。
5.分离珠子，用适量的结合缓冲液洗涤珠子两次。
6.将珠子重悬于DEPC处理过的水中。寡核苷酸包被的颗粒现在适用于下游应用。
例2.从总RNA中纯化mRNA
1.使用前将珠子涡旋20秒。
2.将所需量的珠子移液到无核酸酶的试管中。磁性分离珠子。
3.除去上清液。将珠子重悬于100ul结合缓冲液（20mMTris·Cl，0.5MNaCl;pH值8.0）。
4.在室温（15–25°C）下，将适量的5'-生物素化寡核苷酸（dT）与步骤3中重悬的珠子一起孵育15分钟。
5.用磁力分离珠子。弃去上清液，用200ul结合缓冲液洗涤寡核苷酸结合的珠子两次。
6.将DEPC处理过的水加入总RNA样品中，使最终体积为90μl。
7.将总RNA样品在55°C下孵育5分钟，以破坏二级RNA结构。
8.向总RNA样品中加入10μl5MNaCl。
9.将总RNA添加到步骤5中洗涤的磁珠中。轻轻混合，在室温下杂交3分钟。
10.磁性分离珠子并弃去上清液。用150ul洗涤缓冲液（7mMTris·盐酸，0.17MNaCl;pH值8.0）。
11.在55°C下用适量的DEPC水洗脱mRNA2分钟。磁分离珠并将上清液转移到新管中。
Exa3.生物素化抗体的固定化
1.使用前将珠子涡旋20秒。
2.将50μL（0.5mg）微珠加入1mL结合缓冲液（%吐温20去污剂）中。用结合缓冲液洗涤珠子两次。
3.将颗粒重悬于450ul结合缓冲液中。
4.向颗粒中加入50μl血清或细胞培养上清液。注意：根据用户喜好修改样品体积。如果样品体积为500μL，则用结合缓冲液将其稀释至最终体积500μL。
5.使用旋转器轻轻混合30分钟。
6.Mag分离珠子并弃去上清液。用0.5ml结合缓冲液洗涤珠子两次。
Exa4.细胞富集
磁性纳米颗粒是从组织或器官获得的细胞群混合物中分离细胞（例如CTC、干细胞）的理想选择。
1.使用前将珠子涡旋20秒。
2.等分足够的PuriMag链霉亲和素微珠用于富集实验。注意：20μl通常足以富集多达1x107个细胞。
3.用500μl洗涤缓冲液（%吐温20洗涤剂）洗涤珠子两次。磁力分离并除去上清液。
4.将生物素化抗体添加到纳米颗粒中，并使用样品旋转器孵育15-30分钟。注意：20μl纳米颗粒可与50-1000ng抗体结合。
5.用500μl洗涤缓冲液洗涤微珠抗体偶联物两次。
6.将纳米颗粒抗体偶联物重悬于洗涤缓冲液（20-50μl）中，并将其添加到细胞样品中，总体积为1-5ml。
7.在室温下将珠子与细胞样品在旋转器上孵育30-60分钟。
8.孵育后，用磁铁将纳米颗粒（结合细胞）从溶液中分离出来，并小心地除去上清液。
9.用500μl洗涤缓冲液洗涤珠子两次。
10.分离的细胞既可以保存在冰上以立即进行下游应用，也可以悬浮在细胞培养基中生长。
Exa5.固定化生物素化分子的释放
生物素-链霉亲和素键在恶劣条件下被破坏。在65°C下孵育5分钟或在90°C下在含95%甲酰胺的10中孵育2分钟，通常会解离96%的固定化生物素化DNA。或者，将样品在0.1%SDS中煮沸5分钟以进行蛋白质解离。
请注意，蛋白质会因这种处理而变性，链霉亲和素珠不能重复使用。也有报道称，生物素-链霉亲和素相互作用可以通过在温度高于70°C的非离子水中短暂孵育来破坏。
（本磁珠仅供科研使用！）
